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產(chǎn)品名稱:

CaEs-17人食管癌細胞

產(chǎn)品型號: 產(chǎn)品時間: 2024-07-28
CaEs-17人食管癌細胞
該細胞公司*,培養(yǎng)狀態(tài)下的,現(xiàn)貨一周供應,我公司可100%保障該細胞的質(zhì)量,代數(shù)年輕活性好,不含有細菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體 。

產(chǎn)品概述

CaEs-17人食管癌細胞

細胞英文(簡稱):CaES-17
細胞來源:   ATCC  DSMZ   JCM   ECACC
代次:P3
規(guī)格:T25
細胞數(shù):1x10^6 cells
組織來源:食管癌
細胞形態(tài):貼壁;上皮細胞樣
細胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細胞檢測:細胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
培養(yǎng)條件:DMEM(高糖) +10% FBS;37℃,5% CO2
傳代方法:建議:1:2-1:3 兩天換液一次
凍存條件:*培養(yǎng)基50%+40%FBS+10%DMSO?
CaEs-17人食管癌細胞

傳代細胞培養(yǎng)操作步驟
1、        37度水浴加熱所有試劑。
2、        吸取培養(yǎng)培養(yǎng)皿內(nèi)舊培養(yǎng)液,放置一個干凈離心管內(nèi)。(為稍后終止消化作準備。)
3、        用PBS清洗培養(yǎng)皿,棄去。
4、        向瓶內(nèi)加入消化液(胰蛋白酶液)。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜。(一般一個大皿1ml)
5、        2-5分鐘后,輕輕震蕩培養(yǎng)皿。使細胞從瓶壁脫離形成細胞懸液。顯微鏡下觀察若細胞由貼壁變?yōu)閼腋【图尤胙澹丛囵B(yǎng)液)終止消化。
6、        收集細胞懸液,880轉(zhuǎn)/分、5分鐘離心,棄去上清液。
7、        加培養(yǎng)液至1ml,混勻后取10ul計數(shù)細胞。
8、        根據(jù)實驗要求取適量細胞留種或接種于新的培養(yǎng)皿或96孔板、24孔板中,再加入相應體積的培養(yǎng)液。(90mm大皿是9ml,中皿好像是4mm,6孔板和小皿是2ml,96孔板是100ul)。
9、        接種好的培養(yǎng)皿順時針和逆時針各轉(zhuǎn)三圈,使細胞排列均勻。
10、        放入暖箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
細胞計數(shù)步驟:
1、將計數(shù)板及蓋片擦拭干凈,并將蓋片蓋在計數(shù)板上.
2、將細胞懸液吸出少許,用臺盼蘭溶液對被稀釋后滴加在蓋片邊緣,使懸液充滿蓋片和計數(shù)板之間。(臺盼蘭用于標記死亡細胞。)
3、鏡下觀察,計算計數(shù)板八大格細胞總數(shù),壓線細胞只計左側(cè)和上方的。然后按下式計算:
細胞數(shù)/ml=8大格細胞總數(shù)/ 8×2×10000
細胞凍存與復蘇:
凍存和復蘇的原則:慢凍快融
當細胞冷到零度以下,可以產(chǎn)生以下變化:細胞器脫水,細胞中可溶性物質(zhì)濃度升高,并在細胞內(nèi)形成冰晶。
如果緩慢冷凍,可使細胞逐步脫水,細胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶;相反,結(jié)晶很大,大結(jié)晶會造成細胞膜、細胞器的損傷和破裂。復蘇過程應快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重結(jié)晶。
 1.凍存細胞
(1)選對數(shù)增生期細胞,在凍存前1d換液。
(2)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液,計數(shù),使細胞密度達5×106/m1左右密度,離心,去上清。
(3)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞成再懸液。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑10%二甲基亞砜(DMSO) 或甘油,它是一種滲透性保護劑,可迅速透入細胞,提高胞膜對水的通透性,降低冰點,延緩凍結(jié)過程,能使細胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細胞外,在胞外形成冰晶,減少胞內(nèi)冰晶,從而減少冰晶對細胞的損傷
(4)分裝于無菌凍存管中,每管加1.5m1懸液。
(5)旋好凍存管并仔細檢查,一定要蓋緊,作好標記。
(6)凍存:在特殊的儀器或簡易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40 min時間內(nèi),下降到液氮表面,再停30 min后,直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度,過快能影響細胞內(nèi)水分透出,太慢則促進冰晶形成。
標準程序:
當溫度在-25℃以上時, 1~2℃/min
當溫度達-25℃以下時, 5~10℃/min
當溫度達-100℃時,可迅速放入液氮中
簡易程序:
將冷凍管(管口要朝上)放入紗布袋內(nèi),紗布袋系以線繩,通過線繩將紗布袋固定于液氮罐罐口,按每分鐘溫度下降1~2℃的速度,在40分鐘內(nèi)降至液氮表面,停30分鐘后,直接投人液氮中。
  操作時應戴防護眼鏡和手套,以免液氮凍傷。
2. 復蘇細胞
(1)從罐中取出凍存管。
(2)迅速放入37℃水浴,不時搖動,使其急速融化,30~60s內(nèi)完成。
(3)凍存管用70%酒精擦拭消毒后,打開蓋子,用吸管將細胞懸液注入離心管中,再滴加10 m1培養(yǎng)液。
(4)低速離心(880r/min) 5 min,去上清后再用培養(yǎng)液洗一次。
(5)用培養(yǎng)液適當稀釋后,裝入培養(yǎng)瓶37℃培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后,繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進行培養(yǎng)。
  凍存細胞數(shù)量要充分,密度應達到107/m1,在融后稀釋20倍后,仍能保持5×105/m1數(shù)量。

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