細胞培養(yǎng)步驟：

1.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

①準備F-12K培養(yǎng)基（F-12K : GIBCO,貨號：21127-022);北美胎牛血清，10%; PS 1%。

②培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

③凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

2.細胞處理：

①復蘇細胞：將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

②細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

注意事項：

①收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

②所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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細胞培養(yǎng)步驟及注意事項